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T4 RNA連接酶1催化在單鏈RNA或DNA的末端5個磷酸和3個羥基之間形成磷酸二酯鍵。它需要ATP作為輔助因子。一個單位被定義為將50%等摩爾(125nM)的單鏈5 fam標記的17-mer RNA連接到5個磷酸化的18-mer RNA上所需要的酶量，20 L, 37 C, 30分鐘。
T4 RNA Ligase 1 catalyses the formation of a phosphodiester bond between the terminal 5′ phosphate and 3′ hydroxyl groups of single-stranded RNA or DNA. It requires ATP as a cofactor.
One unit is defined as the amount of enzyme required to ligate 50% of an equimolar mix (125nM) of a single-stranded 5′ FAM-labeled 17-mer RNA to a 5′ phosphorylated 18-mer RNA in 20 μL at 37°C for 30 minutes.

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